Práctica 2: Determinación cualitativa de Factores Rumatoides ( Waaler Rose)

Determinación cualitativa de Factores Reumatoides (Waaler Rose)

Objetivo 
El Waaler Rose es una técnica de hemaglutinación en porta para la detección cuanlitativa y semicuantitativa de FR en suero humano. Los hematíes estabilizados de oveja y sensibilizados con IgG de conejo antihematíe de oveja, son aglutinados por FR presentes en la muestra del paciente. 

Fundamento 
Los factores reumatoides son un grupo de anticuerpos dirigidos contra la fracción Fc de la IgG. Se hallan presentes en un gran número de desordenes reumáticos, pero su principal interés clínico radica en el diagnóstico de la artritis reumatoide. 

Reactivos 

• Waaler Rose - suspensión de hematíes estabilizados de oveja y sensibilizados con IgG de conejo anti-hematíe de oveja

• Control +
• Control -
• Suero salino fisiológico 

Muestras

• Suero fruesco (control +)

Las muestras con fibrina deben ser centrifugadas antes de usar y no debemos usar muestras hemolizadas o lipérmicas. Serán estables durante 8 días si las conservamos a 2-8ºC o 3 meses si están conservadas a -20ºC. 

Materiales y aparataje

• Pipetas automáticas de 50 μl 

• Puntas de pipetas desechables 

• Vaso de rechazo 

• Tarjetas ASO

Procedimiento 

- Método cualitativo (control)

1. Atemperar los reactivos y las muestras a Tª ambiente 
2. Depositamos en el primer pocillo una gota de control positivo y en el segundo pocillo una de control negativo, después añadimos una gota de waaler rose (hematíes de oveja). 
3. Mezclamos con una punta de pipeta 
4. Situamos el porta durante 2 minutos en una superficie plana y después inclinamos el porta con ángulo de 45ºC durante 1 minuto. 

**El exceso de tiempo puede generar falsos positivos

- Método semicuantitativo 

1. Depositamos 50 μl  de suero salino fisiológico en todos los pocillos
2. Añadimos 50 μl  del suero del paciente solo al primer pocillo y mezclamos con la punta de la pipeta. 
3. Después de mezclar en el primer pocillo, vamos diluyendo. Cogemos 50 μl  del primer pocillo y los añadimos al segundo, mezclamos y pasamos otros 50 μl  al tercer pocillo, y continuamos así hasta que terminemos con todos los pocillos. Los 50 μl  restantes del último pocillo se desechan a un tubo de rechazo. 
4. A continuación añadimos una gota de waaler rose ( hematíes de oveja) a cada pocillo. 
5. Mezclamos con una punta de pipeta diferente para cada pocillo.
6. Dejamos reposar la tarjeta sobre una superficie lisa durante 2 minutos y después lo inclinamos en un ángulo de 45ºC durante 1 minuto. 
7. Esperamos a ver le resultado, que nos sale negativo. 

Cálculo del título

Normalmente se calcula el título de anticuerpos, pero a nosotros nos salio todo negativo. 

Para calcular el título: La inversa de la máxima dilución de suero que produce aglutinación visible